原代细胞培养是指直接从生物体内提取细胞、组织和器官后，立即进行的细胞培养。严格来说，这种培养是在成功传代之前进行的，此时的细胞仍然保留其基本生物学特性，例如正常细胞会维持二倍体数。原代细胞能够准确反映特定细胞在体内的生理状况，但它们通常仅能传代少数代数后便停止增殖并进入死亡状态。因此，对于需要大量细胞进行的实验，如生化分解和遗传筛选等，原代细胞并不适用。因此，在体外建立永生化细胞以研究细胞的生长、分化和衰老显得尤为重要。尊龙凯时在为科研工作者提供相关细胞时，介绍了从原代培养到建立永生细胞系的三种方法。

方案一：SV40 Large T介导的永生化细胞

许多病毒基因能够影响细胞周期，其中SV40 T抗原是当前常用的诱导永生化的方法。SV40大T抗原被广泛验证为最简便有效的细胞永生化试剂，其作用机制相对清晰。SV40（猿猴病毒40）编码两种肿瘤抗原：大T抗原及小T抗原，大T抗原不仅是细胞转化所必需，同时它的持续表达对于维持转化细胞的表型至关重要。尽管大T抗原可以促使细胞进入永生化的增殖状态，但它也存在潜在的致癌风险，可能导致细胞的恶性转化。

方案二：hTERT介导的永生化细胞

端粒中含有的逆转录酶（TERT）能够催化端粒酶反转录端粒DNA，进而合成到染色体末端，保持其长度，从而使细胞持续增殖。但正常细胞通常不表达TERT，因此实现永生化的关键是使用转基因技术构建表达载体，将TERT基因转染到细胞中。通过这种方式，可以有效激活端粒酶活性，维持端粒长度，防止染色体端粒的降解，诱导细胞永生化。hTERT永生化细胞在高传代数和使用致癌基因时，能够忠实地反映体内正常细胞的生理特征。

方案三：复合型病毒感染介导的永生化细胞

在某些细胞类型中，仅依靠单一的永生化方法通常难以获得永生细胞，部分细胞对端粒酶介导的方式不适用。针对不同的细胞系，结合抑制细胞周期与hTERT的表达，采用复合型病毒感染的方法，可以更有效地实现细胞的永生化。通过慢病毒转染携带SV40 T及hTERT基因的复合方法，既能够保持细胞原始特性，又避免了基因组的变异。

此外，基因编辑技术、化学诱导及物理手段（如穿刺）等方式也可用于细胞永生化。尊龙凯时提供超过百种人源及动物源的永生化细胞株以及各种永生化细胞培养基供科研工作者选择。

永生化细胞的应用领域

1. 药物筛选与开发：永生化细胞是进行药物筛选和毒性测试的理想模型，能够在实验室中快速、大规模地评估药物的有效性与安全性。

2. 基因研究与功能验证：由于这些细胞能长期增殖，成为研究基因功能及细胞信号通路的重要工具，特别是在基因表达调控及癌症研究中。

3. 癌症研究：众多永生化细胞系源自癌细胞，使其成为癌症发生、发展及治疗研究的重要模型，有助于深入理解癌症的生物机制。

4. 抗体生产：永生化细胞，例如CHO细胞，广泛应用于单克隆抗体及重组蛋白的生产，对生物药物的开发具有重大意义。