摘要: 本文展示了2024年9月中检院单抗室新发表在Electrophoresis和Journal of Chromatography A期刊上的两篇文章，分别对多个半胱氨酸偶联的抗体-药物偶联物（cys-ADC）进行表征，尤其关注电荷异质性分析的研究结果。

前言: 这两篇文章的研究对象是cys-ADC，这类产品通过一个可裂解的连接子，将具有细胞毒性的药物偶联至单克隆抗体上。在单克隆抗体精准识别靶细胞（通常为癌细胞）后，整个ADC分子被内吞，连接子在细胞内裂解，释放出细胞毒性药物，从而精准杀灭靶细胞，并最大程度上减少高细胞毒性药物可能对患者造成的副作用。针对本文讨论的cys-ADC，在偶联过程中，单抗轻重链间的二硫键被部分还原，暴露出自由巯基用于小分子药物的偶联，使轻重链间仅依靠非共价力相互结合，因此能够利用非变性质谱（native MS）技术在cys-ADC的表征中获得更深入的结果。

工作亮点: 这两篇文章中的突出亮点在于利用成像等电聚焦毛细管电泳（icIEF）和非变性质谱技术联用，揭示了cys-ADC电荷异质性的重要性。cys-ADC产品的单抗部分包含多种翻译后修饰，如糖基化、去酰胺和氧化等，加上小分子药物的偶联，使得电荷异质性极高。传统的液质联用技术在分离其电荷变异体时限于一定程度，而icIEF技术凭借不同的分离原理，从另一个角度实现了对ADC电荷异质体的有效分离，随后采用基于Orbitrap平台的高灵敏度非变性质谱技术对每个电荷异质峰进行精确的在线蛋白分子量测定。

结果与讨论: 研究人员首先使用NIST mAb标准品开发了icIEF-native MS方法，所用的设备包括Advanced Electrophoresis Solutions Ltd（AES）的CE Infinite Automated Preparative icIEF System与Thermo Scientific™ Orbitrap™ Exploris™ 240超高分辨质谱仪。该icIEF系统具备分析型/直连型/离线分馏收集功能，并与质谱直连，灵活高效，无需额外购置离子源接口。AEstyle系列两性电解质则可实现超高分辨率的电荷异质体分离，且对质谱污染小。同时，Orbitrap Exploris 240质谱仪的高敏感性与高质量精度，有助于发现并准确识别低丰度组分，对于非变性质谱条件下的完整分子量分析尤其重要。在非变性条件下，蛋白的带电量减少，质谱响应降低，这一技术显得更为关键。

结论: 本文的两篇文章强调了创新型icIEF-native MS技术在cys-ADC电荷异质性分析中的重要贡献。该技术可广泛应用于具有非共价相互作用分子的电荷异质性分析中，提供完整分子量信息，满足各类组分鉴定的需求。对于需要合规的客户，尊龙凯时旗下的变色龙软件可完美满足客户的合规性要求，提升实验效率，确保数据可靠性。