尊龙凯时人胰腺癌细胞HPAFⅡ培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人胰腺癌细胞HPAFⅡ
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：MEM + 10% FBS + 1%丙酮酸钠 + 1% L-谷氨酰胺 + 1% P/S
贴壁传代方法：第一次建议1:2传代，传代后每两天更换培养液。
备注：将无菌离心管收集瓶中的培养基用于过渡对比培养，如效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理步骤

收到细胞后，建议在细胞状态良好时用完全培养液灌满瓶口并封好，以确保运输安全。使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒后，将其放入超净台内进行严格无菌操作。然后将细胞瓶放置于37℃、5% CO2培养箱中，静置3-4小时以稳定细胞状态再进行处理。应显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（建议40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片为售后重要依据，若未提供照片默认收到状态良好。

为确保培养效果，建议传代时一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自行配制的完全培养基，以便进行对比。此外，换液后应将瓶盖松动。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞未超过80%汇合度，收集培养液至离心管中，留5ml完全培养基，并放入37℃、5% CO2孵箱内培养。如细胞密度超80%，即可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况。当大部分细胞变圆并脱落时，迅速加5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落，吸出细胞悬液，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清后补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS洗涤一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，于显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基终止消化，并轻轻吹打使其脱落。随后将悬液转移至15ml离心管，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清后，沉淀细胞加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接置于-80℃冰箱中，若后期要转入液氮罐，则需在-80℃冰箱存放24小时以上后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护设备），迅速置入37℃水浴中解冻，直至无结晶后，用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，并放于37℃、5% CO2培养箱中。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，细胞可能因贴壁不牢而脱落，这是正常现象。如脱落细胞较多，可将所有培养液收集至离心管中，1000rpm离心5分钟，收集上清用于过渡培养。如果需要，加入胰酶1-2ml，轻轻吹打、重悬，并消化1-2分钟后加入5ml完全培养基来终止反应。再进行离心后弃上清，补加1-2ml完全培养基重悬。按照1:2比例进行分瓶传代（两个T25），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

五、售后条款

关于细胞问题的处理原则：在以下情况下可考虑重发：1)运输途中的问题，出现细胞丢失、瓶身破损或培养液泄漏，皆可重发；2)若细胞在48小时内出现污染，需提供真实实验结果进行核实，重发；3)常温发货细胞静置24小时后或干冰冻存发货细胞复苏后24小时内大多数细胞未存活，并提供真实清晰的细胞状态照片，重发；4)如干冰发货细胞复苏后未存活或在常温下静置4小时后出现污染，重发；5)若细胞活性不足需在7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后重发；6)收到细胞当天及第2、3天内拍照，如3天未告知，视为产品合格。7)4-7天内出现问题需提供收到细胞前3天的照片，细胞出现问题时照片以及详细步骤，并与技术人员沟通，由技术人员判断责任。

不予重发的情况包括：1)客户造成的污染；2)操作不当导致细胞状态不佳；3)使用非推荐培养体系使细胞状态不佳；4)未能提供培养前3天的照片；5)细胞在其他处理后；6)收到细胞后2天内未告知；7)视具体情况而定。

通过尊龙凯时的专业服务，我们致力于为您提供高品质的细胞培养与处理体验。